· poliakrilamidagel harus terdiri dari monomer akrilamida, bahan awal polimerisasi, katalis, serta campuran garam dan penyangga yang tepat bersama-sama.
· akrilamidadan BIS (N, N'- metilen ganda akrilamida) merupakan monomer yang membentuk matriks gel.
· amonium persulfat memulai proses polimerisasi perekat. Formulasi lem membutuhkan larutan amonium persulfat 10% yang disiapkan dalam air. Sebagian besar informasi menunjukkan perlunya penggunaan aktif. Namun, larutan 10% dapat ditempatkan pada suhu 4℃ selama beberapa minggu tanpa kehilangan aktivitas yang signifikan. Buat hingga 10 ml dan buang saat lem gagal menggumpal.
Tip: Persentaseakrilamidadalam pengurutan lem dan lem protein tidaklah sama. Jika menggunakan larutan akrilamida: BIS yang sudah jadi, pastikan untuk mendapatkan botol yang tepat.
TEMED (N, N, N', N'-tetramethyl ethylenediamine) adalah katalis, dalam botol berwarna coklat, yang ditempatkan di lemari es. Tambahkan sebelum menuangkan lem.
· Elektroforesis poliakrilamid Kaca yang digunakan dalam elektroforesis harus dicuci sebelum dan sesudah setiap kali digunakan. Setelah elektroforesis, cuci dengan sikat dan kain lembut dalam air sabun panas, bilas dengan air suling dan biarkan kering.
· Kelembaban dan debu dapat menyebabkan polimer berongga. Sebelum elektroforesis, bersihkan pelat kaca dengan pembersih kaca dan lap dengan sikat lembut. Cuci dengan air suling dan keringkan secara menyeluruh dengan tisu. Membilas dengan etanol 70% sebelum menyeka dengan kertas membantu membersihkan dan mempercepat pengeringan. Tambahkan sampel akrilamida secara berurutan: BIS, air, larutan penyangga, amonium persulfat, TEMED. Kocok dengan baik dan tuang segera.
Tidak perlu mengeluarkan gas dari poliakrilamida sebelum polimerisasi. (Akrilamida biasanya ditempatkan dalam ruang hampa untuk menghilangkan gelembung karena oksigen menghambat polimerisasi.)
Ujung sampel titik lem horizontal.
· Letakkan selembar kertas hitam di kotak paling bawah, latar belakang hitam untuk membuat beberapa lubang sampel agar dapat dilihat lebih jelas.
· Tangki lem berisi penyangga, tepat di atas koloid.
· Jika tepian memiliki lampu, nyalakan lampu, biarkan cahaya menyinari koloid. Tarik sampel ke dalam pipet.
· menggunakan alat pipet otomatis.
· Pada 10-200 mu 1 titik pergerakan cairan dapat digunakan di sebagian besar titik pada sampel. Untuk lubang sampel yang sangat kecil (kurang dari 10μ1), kepala pipet panjang yang digunakan untuk mengurutkan lem lebih praktis.
· Pipet yang baru saja direndam dalam sampel, menghirup cairan yang bergerak perlahan. Sampel mungkin tampak lengket karena gliserin, dan pemompaan yang cepat dapat menarik gelembung udara ke dalam kepala pipet.
· Sampel setelah dihirup, kepala pipet akan bergerak perlahan di tepi pipa atau kertas lap akan menyedot cairan di luar tetesan. Berhati-hatilah agar tidak menyedot sampel.
Tempatkan sampel ke dalam lubang sampel
· Alat pipet untuk menjaga sedikit tekanan, membuat sampel sedikit bergerak di bagian kepala cairan yang meluap.
· Kepala pipet yang dimasukkan ke dalam buffer, sedikit lebih tinggi dari lubang spot, pertahankan tekanan positif. Ujung pipet dapat dimasukkan ke dalam lubang kecil.
· Keluarkan sampel secara perlahan dan mantap. Ujung pipet ditempatkan di atas lubang sampel titik, dan sampel akan tenggelam ke dalam lubang. Biarkan sampel tenggelam untuk mengisi lubang sampel alih-alih mendorongnya.
· Setelah tetes terakhir sampel dengan kepala cairan, cairan akan bergerak ke kaki kedua, perlahan-lahan naikkan gerakan cairan, keluar dari buffer
Bagaimana cara melakukan pengambilan sampel lem vertikal?
· Lubang sampel titik lem vertikal terbentuk di antara dua lembar kaca. Pada lem yang sangat tipis, kepala pipet bahkan tidak dapat dimasukkan di antara dua pelat kaca. Perhatikan gliserinnya! Letakkan kepala pipet di atas lubang sampel dan sampel akan tenggelam ke dalam lubang.
· Sebelum mengambil sampel, pastikan untuk meletakkan titik vertikal lubang sampel gel polipropilena asil yang sudah dibilas hingga bersih. Bersihkan akrilamida yang tidak terpolimerisasi dan air yang mungkin muncul di dasar lubang sampel. Air dapat membuat lubang sampel menjadi jauh lebih kecil. Gunakan spuit 25 ml atau 50 ml dan jarum ukuran 18. Tuangkan buffer elektroforesis dan bilas lubang sampel dengan hati-hati.
· Mungkin sulit untuk melihat lubang sampel, tetapi pada saat yang sama, sisanya mudah. Jika ada lubang berlebih, buffer sampel dapat diuji dengan bromofenol biru.
Waktu posting: 31-Mar-2023