Kewaspadaan untuk elektroforesis gel poliakrilamida

· poliakrilamidagel harus dibuat dengan monomer akrilamida, bahan awal polimerisasi, katalis, dan campuran garam dan buffer yang tepat bersama-sama.

· akrilamidadan BIS (N, N' - methylene double acrylamide) merupakan matriks gel berbentuk monomer.

· amonium persulfat memulai proses polimerisasi perekat. Formulasi lem memerlukan larutan amonium persulfat 10% yang dibuat dalam air. Sebagian besar informasi menunjukkan perlunya penggunaan aktif. Namun, larutan 10% dapat ditempatkan pada suhu 4℃ selama beberapa minggu tanpa kehilangan aktivitas yang berarti. Buat hingga 10 ml dan buang jika lem tidak dapat menyatu.

Tip: Persentaseakrilamidadalam mengurutkan lem dan lem protein tidaklah sama. Jika menggunakan akrilamida siap pakai: larutan BIS, pastikan untuk mendapatkan botol yang tepat.

· TEMED (N, N, N', N' - tetramethyl ethylenediamine) adalah katalis, dalam botol berwarna coklat, ditempatkan di lemari es. Tambahkan sesaat sebelum menuangkan lem.

· Elektroforesis poliakrilamida kaca bekas dalam elektroforesis harus dicuci sebelum dan sesudah setiap waktu. Setelah elektroforesis, cuci dengan sikat lembut dan kain dalam air sabun panas, bilas dengan air suling dan biarkan hingga kering.

· Kelembapan dan debu dapat disebabkan oleh polimer berongga. Sebelum elektroforesis, bersihkan pelat kaca dengan pembersih kaca dan lap dengan sikat lembut. Cuci dengan air suling dan keringkan secara menyeluruh dengan lap kertas. Membilas dengan etanol 70% sebelum menyeka dengan kertas membantu membersihkan dan mempercepat pengeringan. Tambahkan sampel akrilamida berturut-turut: BIS, air, larutan buffer, amonium persulfat, TEMED. Kocok rata dan segera tuangkan.

Poliakrilamida tidak perlu dihilangkan gasnya sebelum polimerisasi. (Akrilamida biasanya ditempatkan dalam ruang hampa untuk menghilangkan gelembung karena oksigen menghambat polimerisasi.)

Tip contoh titik lem horizontal.

· letakkan selembar kertas hitam di kotak paling bawah, latar belakang hitam untuk membuat beberapa lubang sampel agar dapat dilihat lebih jelas.
· Tangki lem diisi buffer, tepat di atas koloid.
· Jika dipinggir ada lampunya, nyalakan lampunya, biarkan lampunya bersinar koloid. Tarik sampel ke dalam pipet.
· menggunakan perangkat pemipetan otomatis.
· dalam 10-200 mu 1 titik bergerak cairan dapat digunakan di sebagian besar titik pada sampel. Untuk lubang sampel yang sangat kecil (kurang dari 10μ1), kepala pipet panjang yang digunakan untuk mengurutkan lem lebih nyaman.

· memipet cukup merendam sampel, menghirup cairan yang bergerak perlahan. Sampel mungkin tampak lengket karena gliserin, dan pemompaan yang cepat dapat menarik gelembung udara ke dalam kepala pipet.

· sampel setelah menghirup kepala pemipaan, akan menggerakkan kepala cairan dengan lembut di tepi pipa atau menyeka kertas yang menyedot kepala cairan di luar tetesan. Berhati-hatilah untuk tidak menyedot sampel.

Tempatkan sampel ke dalam lubang sampel

· Perangkat pemipetan untuk menjaga sedikit tekanan, membuat sampel sedikit menggerakkan kepala cairan yang meluap.
· kepala pipet dimasukkan ke dalam penyangga, sedikit lebih tinggi dari lubang titik, pertahankan tekanan positif. Ujung pipet bisa dimasukkan ke dalam lubang kecil.
· perlahan dan mantap sampel keluar. Ujung pipet diletakkan di atas lubang titik sampel, dan sampel akan tenggelam ke dalam lubang tersebut. Biarkan sampel tenggelam untuk mengisi lubang sampel alih-alih mendorongnya ke dalam.
· sekali tetes terakhir sampel dengan kepala cair, cairan akan berpindah ke kaki kedua, perlahan-lahan naikkan cairan bergerak, keluar dari buffer

Bagaimana cara melakukan pengambilan sampel lem vertikal?

· lubang sampel titik lem vertikal terbentuk di antara dua potong kaca. Pada lem yang sangat tipis, kepala pipet bahkan tidak dapat disisipkan di antara dua pelat kaca. Perhatikan gliserinnya! Letakkan kepala pipet di atas lubang sampel dan sampel akan tenggelam ke dalam lubang tersebut.
· Titik sampel sebelumnya, pastikan untuk meletakkan titik vertikal lubang sampel polipropilena asil gel yang dibilas bersih. Bersihkan akrilamida yang tidak terpolimerisasi dan air yang mungkin muncul di dasar lubang sampel. Air dapat membuat lubang sampel menjadi lebih kecil secara signifikan. Gunakan jarum suntik 25ml atau 50ml dan jarum ukuran 18. Tuangkan buffer elektroforesis dan siram lubang sampel dengan hati-hati.
· Mungkin sulit untuk melihat lubang sampel, namun pada saat yang sama, sisanya mudah. Jika terdapat lubang berlebih, buffer sampel dapat diuji dengan bromofenol biru.