· poliakrilamidaGel harus oleh monomer akrilamida, bahan awal polimerisasi, katalis, dan hak garam dan campuran buffer bersama -sama.
· akrilamidadan bis (n, n '- metilen ganda akrilamida) adalah matriks gel bentuk monomer.
· Ammonium persulfate mulai proses polimerisasi perekat. Formulasi lem membutuhkan larutan amonium persulfat 10% yang disiapkan dalam air. Sebagian besar informasi menunjukkan perlunya penggunaan aktif. Namun, solusi 10% dapat ditempatkan pada 4 ℃ selama beberapa minggu tanpa kehilangan aktivitas yang signifikan. Buat hingga 10 ml dan buang ketika lem gagal untuk dikumpulkan.
Tip: Persentase dariakrilamidaDalam sekuensing lem dan lem protein tidak sama. Jika menggunakan premade acrylamide: BIS Solution, pastikan untuk mendapatkan botol yang tepat.
· Temped (N, N, N ', N'- Tetramethyl ethylenediamine) adalah katalis, dalam botol coklat, ditempatkan di lemari es. Tambahkan sesaat sebelum menuangkan lem.
· Elektroforesis poliakrilamida yang digunakan kaca dalam elektroforesis harus dicuci sebelum dan sesudah setiap kali. Setelah elektroforesis, cuci dengan sikat lembut dan kain dalam air sabun panas, bilas dengan air suling dan berdiri hingga kering.
· Kelembaban dan debu dapat menyebabkan dengan polimer berongga. Sebelum elektroforesis, bersihkan pelat kaca dengan pembersih kaca dan bersihkan dengan sikat lembut. Cuci dengan air suling dan keringkan dengan sapuan kertas. Membilas dengan etanol 70% sebelum diseka dengan kertas membantu membersihkan dan mempercepat pengeringan. Tambahkan sampel akrilamida berturut -turut: BIS, air, larutan buffer, amonium persulfate, Temped. Kocok dengan baik dan tuangkan segera.
Tidak perlu mendegrasi poliakrilamida sebelum polimerisasi. (Akrilamida dulu ditempatkan dalam ruang hampa untuk menghilangkan gelembung karena oksigen menghambat polimerisasi.)
Tip sampel titik lem horizontal.
· Masukkan selembar kertas hitam di kotak bawah, latar belakang hitam untuk membuat beberapa lubang sampel untuk melihat lebih jelas.
· Buffer terisi tangki lem, tepat di atas koloid.
· Jika tepi memiliki cahaya, nyalakan lampu, biarkan cahaya bersinar koloid. Gambarlah sampel ke dalam pipet.
· Menggunakan perangkat pemipaan otomatis.
· Dalam 10-200 MU 1 Titik bergerak cair dapat digunakan di sebagian besar titik pada sampel. Untuk lubang sampel yang sangat kecil (kurang dari 10μ1), kepala pipet panjang yang digunakan untuk lem sekuensing lebih nyaman.
· Pipeting hanya tenggelam dalam sampel, menghirup cairan bergerak perlahan. Sampel mungkin tampak lengket dengan gliserin, dan pemompaan yang cepat dapat menarik gelembung udara ke kepala pipet.
· Sampel setelah menghirup kepala pipetting, akan menggerakkan kepala cairan dengan lembut di tepi pipa atau menyeka kertas mengisap kepala cair di luar tetesan. Berhati -hatilah untuk tidak mengisap sampel.
Tempatkan sampel ke dalam lubang sampel
· Perangkat pemipaan untuk menjaga sedikit tekanan, membuat sampel sedikit menggerakkan kepala cair yang meluap.
· Kepala pipetting dimasukkan ke dalam buffer, sedikit lebih tinggi dari lubang spot, mempertahankan tekanan positif. Ujung pipet dapat dimasukkan ke dalam lubang kecil.
· Perlahan dan mantap sampel keluar. Ujung pipet ditempatkan di atas lubang sampel titik, dan sampel akan tenggelam ke dalam lubang. Biarkan sampel tenggelam untuk mengisi lubang sampel alih -alih mendorong.
· Setelah penurunan sampel terakhir dengan kepala cair, cairan akan bergerak ke kaki kedua, perlahan -lahan angkat gerakan cairan, keluar dari buffer
Bagaimana cara melakukan pengambilan sampel lem vertikal?
· Lubang sampel titik lem vertikal terbentuk di antara dua potong kaca. Dalam lem yang sangat tipis, kepala pipet bahkan tidak dapat dimasukkan di antara dua pelat kaca. Tonton gliserin! Letakkan kepala pipet di atas lubang sampel dan sampel akan tenggelam ke dalam lubang.
· Titik sampel sebelumnya, pastikan untuk meletakkan titik vertikal lubang sampel gel polipropilen asil dibilas. Cuci akrilamida yang tidak terpolimerisasi dan air yang mungkin muncul di bagian bawah lubang sampel. Air dapat membuat lubang sampel secara signifikan lebih kecil. Gunakan jarum suntik 25ml atau 50ml dan jarum 18-gauge. Tuang dalam buffer elektroforesis dan siram lubang sampel dengan hati -hati.
· Mungkin sulit untuk melihat lubang sampel, tetapi pada saat yang sama, sisanya mudah. Jika ada lubang berlebih, buffer sampel dapat diuji dengan bromophenol biru.
Waktu posting: Mar-31-2023